GDSBio NGS Library Construction Fast DNA Library Plus Prep Kit สำหรับ MGI

รายละเอียดสินค้า

ห้องสมุด DNA ที่รวดเร็วบวกชุดเตรียมสำหรับ MGI

[ชื่อผลิตภัณฑ์]

Fast DNA Library Plus Prep Kit สำหรับ MGI

[แมว.No./Spec.]

KM004-A/24 rxns;KM004-B/96 rxns;กระสอบตัวอย่าง/ 6 rxns

[รายละเอียดสินค้า]

ชุดนี้มุ่งเป้าไปที่แพลตฟอร์มการหาลำดับปริมาณงานสูงของ MGI ให้รูปแบบการสร้างไลบรารี DNA ที่สะดวกและเป็นสากลในหลอดเดียวรวมการแยกส่วน การซ่อมแซมส่วนปลาย และ A-Tailing เข้าไว้ในขั้นตอนเดียว ทำให้ลดเวลาในการสร้างห้องสมุดลงได้อย่างมาก และลดข้อผิดพลาดที่เกิดจากขั้นตอนที่น่าเบื่อหลังจากการแยกส่วนและการเตรียมขั้นสุดท้าย ผลิตภัณฑ์สามารถเชื่อมต่อโดยตรงกับอะแดปเตอร์โดยไม่ต้องทำให้บริสุทธิ์เพิ่มเติม และขั้นตอนที่ตามมาจะเหมือนกับ #KM001 Fast DNA Library Prep Kit สำหรับ MGIการหาปริมาณไลบรารีแบบสมบูรณ์สามารถทำได้ด้วยวิธี dsDNA fluorescent dye (เช่น Thermo Qubit Flex Fluorometer) หรือ PCR การหาปริมาณแบบสัมบูรณ์ หลังจากเจือจางไลบรารีให้มีความเข้มข้นที่เหมาะสม

[ประเภทตัวอย่าง]

ตารางที่ 1 อินพุตที่แนะนำสำหรับ DNA ทั่วไป

[สภาพการเก็บรักษาและอายุการเก็บรักษา]

รีเอเจนต์ทั้งหมดควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20°CLigation Buffer เป็นเรื่องปกติที่คริสตัลจะตกตะกอนที่อุณหภูมิต่ำ ควรปรับให้สมดุลกับอุณหภูมิห้องก่อนใช้งานสินค้ามีอายุ 12 เดือน

[ส่วนประกอบ]

*บัฟเฟอร์ FEP เป็นบัฟเฟอร์ปฏิกิริยาการเตรียมการแยกส่วนและสิ้นสุดFEP Enzyme Mix เป็นส่วนผสมของเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับการแยกส่วนและการเตรียมขั้นสุดท้าย

* หากมีมากกว่าหนึ่งตัวอย่าง แนะนำให้ใช้ #KM002 และ #KM003 อะแด็ปเตอร์ไพรเมอร์ผสมชุดนี้มีชุดไพรเมอร์ ลำดับไพรเมอร์มีดังนี้:

5'-TGTGAGCCAAGGAGTTG-3'

5'-GAACGACATTGGCTACGA-3'

หมายเหตุ: เม็ดบีดสำหรับการเลือกที่แนะนำ: #NC1011 GDSPure DNA Selection Magbeads หรือเม็ดบีด AMPure XP

[หมายเหตุ]

1. เรามีชุดไพรเมอร์ Universal Adapter สองประเภท (อะแดปเตอร์ GDS, #KM002 และ #KM003 ซื้อแยกต่างหาก) แต่ลูกค้ายังสามารถเลือกจากผู้ผลิตรายอื่นหรือสังเคราะห์อะแดปเตอร์ของตนเองสำหรับแพลตฟอร์มลำดับ MGIAdapter มากเกินไปจะนำไปสู่การสร้าง Adapter dimer และ Adapter ที่ไม่เพียงพอจะทำให้เอาต์พุตไลบรารีเหลือน้อยดังนั้นความเข้มข้นของ Adapter ที่เหมาะสมจะเป็นตัวกำหนดความเข้มข้นและคุณภาพของไลบรารีความเข้มข้นของอะแด็ปเตอร์ที่แนะนำสำหรับอินพุต DNA ในปริมาณต่างๆ แสดงไว้ในตารางต่อไปนี้:

ตารางที่ 2 ความเข้มข้นในการใช้งานที่แนะนำของอะแดปเตอร์

* แสดงเป็นอัตราส่วนปริมาตรของอะแดปเตอร์ต่อสารเจือจาง

2. เอนไซม์ที่ใช้ใน 2× HIFI Library PCR Master Mix คือ DNA polymerase ตระกูล B ซึ่งมีพอลิเมอเรส 5 '-3' และกิจกรรม exonuclease 3 '-5' แต่ไม่มีกิจกรรม exonuclease 5 '-3'มีความเที่ยงตรงสูงและเป็นเนื้อเดียวกัน และมีความสามารถในการสังเคราะห์ที่ยั่งยืนการควบคุมจำนวนรอบการขยายอย่างเข้มงวดมีความสำคัญอย่างยิ่งสำหรับเอาต์พุตของไลบรารีตารางต่อไปนี้แสดงจำนวนรอบการขยายสัญญาณที่แนะนำซึ่งสอดคล้องกับปริมาณ DNA ที่ป้อนเข้าที่แตกต่างกัน:

ตารางที่ 3 จำนวนรอบการขยายสัญญาณที่แนะนำซึ่งสอดคล้องกับอินพุตตัวอย่างต่างๆ

หมายเหตุ: 1. ตารางด้านบนแสดงผลการทดสอบโดยใช้ DNA มาตรฐาน 150bp ซึ่งใช้สำหรับการอ้างอิงเท่านั้น

2. หากใช้ตัวเชื่อมต่อที่ไม่สมบูรณ์ ควรขยายจำนวนรอบขั้นต่ำ (1-3) เพื่อให้ได้ไลบรารีที่สมบูรณ์

3. หากคุณภาพของ DNA ที่ป้อนไม่ดี หรือมีการเลือกขนาดในระหว่างการก่อสร้างห้องสมุด ควรเพิ่มจำนวนรอบการขยายสัญญาณอย่างเหมาะสม

[กระบวนการสร้างห้องสมุดมาตรฐาน]

การแยกส่วนและการซ่อมแซมจุดสิ้นสุด

1. กำหนดองค์ประกอบของตัวทำละลายของแม่แบบ DNA หากไม่มี EDTA ให้ดำเนินการโดยตรงไปยังขั้นตอนที่ 2หากมี EDTA ควรใช้เม็ดแม่เหล็ก 2.2 เท่าในการทำให้บริสุทธิ์ หรือควรเพิ่มปริมาตรของบัฟเฟอร์การทำให้บริสุทธิ์ที่สอดคล้องกันตามเนื้อหาของ EDTA ในตารางต่อไปนี้สำหรับการทำให้เป็นกลาง:

2. เตรียมปฏิกิริยาต่อไปนี้ในหลอด PCR ขนาด 200 ไมโครลิตร:

3. เติม FEP Enzyme Mix 10 μl ลงในระบบข้างต้น เป่าให้ทั่ว ปั่นแยกเป็นเวลาสั้นๆ และใส่ลงในเครื่องมือ PCR ทันทีสำหรับปฏิกิริยาต่อไปนี้:

ตารางที่ 4 ระยะเวลาที่จำเป็นในการรับห้องสมุดขนาดต่างๆ

อแดปเตอร์ แอลปฏิกิริยา

1. ดำเนินการปฏิกิริยา ligation โดยเร็วที่สุดหลังจากการแยกส่วนและการเตรียมการสิ้นสุด

2. เจือจางอะแดปเตอร์ตามตารางที่ 2

3. เตรียมระบบปฏิกิริยาต่อไปนี้:

4. หมุนวนเบา ๆ และหมุนสั้น ๆ เพื่อให้ส่วนผสมเข้ากันดี หมุนเหวี่ยงสั้น ๆ แล้วรวบรวมของเหลวทั้งหมดไปที่ด้านล่างของหลอด

5. ทำปฏิกิริยาต่อไปนี้ในวงจรความร้อน:

ที่แนะนำสทางออกสำหรับการล้าง PCR/การเลือกขนาด(ควรปรับปริมาตรเม็ดแม่เหล็กเฉพาะตามตัวอย่างจริงขนาด)

1. เตรียมผลิตภัณฑ์ ligation 100 ไมโครลิตรลงในหลอดปั่นแยกที่เหมาะสม

2. เติมเม็ดแม่เหล็กสำหรับการเลือก DNA ที่แขวนลอยใหม่ 100 ไมโครลิตรลงในตัวอย่างค่อยๆ เป่าด้วยปิเปต 10 ครั้ง (หรือกระแสน้ำวนเป็นเวลา 30 วินาที)บ่มตัวอย่างเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง

3. วางท่อบนชั้นวางแม่เหล็กที่เหมาะสมเพื่อแยกเม็ดบีดออกจากส่วนเหนือตะกอนเมื่อสารละลายใสแล้ว ให้ค่อยๆ ถอดและทิ้งส่วนเหนือตะกอนด้วยปิเปต (อย่าทิ้งเม็ดบีดส์)

4. เติมเอทานอล 80% ที่เตรียมขึ้นใหม่ 200 ไมโครลิตรลงในหลอดในขณะที่อยู่ในชั้นวางแม่เหล็กบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 วินาที จากนั้นนำส่วนเหนือตะกอนออกอย่างระมัดระวังและทิ้งไป (อย่ารบกวนเม็ดบีดส์)

5. ทำซ้ำขั้นตอนที่ 4 หนึ่งครั้งสำหรับการซักทั้งหมดสองครั้ง

หมายเหตุ: ตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้เอาของเหลวที่มองเห็นออกทั้งหมดหลังจากการซักครั้งที่สอง

6. ผึ่งลมให้เม็ดแม่เหล็กแห้งจนพื้นผิวของเม็ดแม่เหล็กไม่มีความมันเงาชัดเจน ขณะที่หลอดอยู่บนชั้นวางแม่เหล็กโดยเปิดฝาไว้

หมายเหตุ: อย่าทำให้เม็ดบีดแห้งเกินไป อาจส่งผลให้การฟื้นตัวของ DNA ลดลงเมื่อลูกปัดเริ่มแตกแสดงว่าแห้งเกินไป

7. ถอดท่อออกจากชั้นวางแม่เหล็กเติมบัฟเฟอร์การชะ 22 ไมโครลิตร (10 มิลลิโมลาร์ Tris-HCl, pH8.0-8.5) ลงในหลอดผสมให้เข้ากันโดยการปิเปตขึ้นและลงอย่างน้อย 10 ครั้งหรือบนเครื่องผสมน้ำวนเป็นเวลา 30 วินาทีบ่มเป็นเวลา 3-5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง

8. วางท่อบนชั้นวางแม่เหล็กหลังจากผ่านไป 5 นาที (หรือเมื่อสารละลายใส) ให้ย้ายสารลอยเหนือตะกอน 20 ไมโครลิตรไปยังหลอดใหม่การเลือกเสร็จสิ้น และสามารถใช้ DNA ที่เลือกสำหรับการทดลองในภายหลังหรือเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20°C เป็นเวลานาน

การขยายห้องสมุด

1. เตรียมปฏิกิริยาต่อไปนี้ในหลอด PCR:

2. หมุนวนเบา ๆ และหมุนสั้น ๆ เพื่อให้ส่วนผสมเข้ากันดี หมุนเหวี่ยงสั้น ๆ และรวบรวมของเหลวทั้งหมดไปที่ด้านล่างของหลอด

3. ทำปฏิกิริยาต่อไปนี้ในวงจรความร้อน:

ที่แนะนำสทางออกสำหรับการล้าง PCR/การเลือกขนาด(ควรปรับปริมาตรเม็ดแม่เหล็กเฉพาะตามตัวอย่างจริงขนาด)

1. เตรียมผลิตภัณฑ์ ligation 50 ไมโครลิตรลงในหลอดปั่นแยกที่เหมาะสม

2. เติมเม็ดแม่เหล็กสำหรับการเลือก DNA ที่แขวนลอยใหม่ 45 ไมโครลิตรลงในตัวอย่างค่อยๆ เป่าด้วยปิเปต 10 ครั้ง (หรือกระแสน้ำวนเป็นเวลา 30 วินาที)บ่มตัวอย่างเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง

3. วางท่อบนชั้นวางแม่เหล็กที่เหมาะสมเพื่อแยกเม็ดบีดออกจากส่วนเหนือตะกอนเมื่อสารละลายใสแล้ว ให้ค่อยๆ ถอดและทิ้งส่วนเหนือตะกอนด้วยปิเปต (อย่าทิ้งเม็ดบีดส์)

4. เติมเอทานอล 80% ที่เตรียมขึ้นใหม่ 200 ไมโครลิตรลงในหลอดในขณะที่อยู่ในชั้นวางแม่เหล็กบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 วินาที จากนั้นนำส่วนเหนือตะกอนออกอย่างระมัดระวังและทิ้งไป (อย่ารบกวนเม็ดบีดส์)

5. ทำซ้ำขั้นตอนที่ 4 หนึ่งครั้งสำหรับการซักทั้งหมดสองครั้ง

หมายเหตุ: ตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้เอาของเหลวที่มองเห็นออกทั้งหมดหลังจากการซักครั้งที่สอง

6. ผึ่งลมให้เม็ดแม่เหล็กแห้งจนพื้นผิวของเม็ดแม่เหล็กไม่มีความมันเงาชัดเจน ขณะที่หลอดอยู่บนชั้นวางแม่เหล็กโดยเปิดฝาไว้

หมายเหตุ: อย่าทำให้เม็ดบีดแห้งเกินไป อาจส่งผลให้การฟื้นตัวของ DNA ลดลงเมื่อลูกปัดเริ่มแตกแสดงว่าแห้งเกินไป

7. ถอดท่อออกจากชั้นวางแม่เหล็กเติมบัฟเฟอร์การชะ 22 ไมโครลิตร (10 มิลลิโมลาร์ Tris-HCl, pH8.0-8.5) ลงในหลอดผสมให้เข้ากันโดยการปิเปตขึ้นและลงอย่างน้อย 10 ครั้งหรือบนเครื่องผสมน้ำวนเป็นเวลา 30 วินาทีบ่มเป็นเวลา 3-5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง

8. วางท่อบนชั้นวางแม่เหล็กหลังจากผ่านไป 5 นาที (หรือเมื่อสารละลายใส) ให้ย้ายสารลอยเหนือตะกอน 20 ไมโครลิตรไปยังหลอดใหม่การคัดเลือกเสร็จสิ้นแล้ว และ DNA ที่เลือกสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2-8°C เป็นเวลา 1-2 สัปดาห์ หรือเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20°C เป็นเวลานาน

[ภาคผนวก]รูปแบบที่แนะนำสำหรับการเลือกสองด้าน

หากจำเป็นต้องเลือกแบบสองรอบ เรามีรูปแบบต่อไปนี้เพื่อเลือกปริมาตรเม็ดแม่เหล็กที่เหมาะสมตามขนาดไลบรารีที่คาดไว้สามารถเลือกขนาดได้ก่อนสิ้นสุดการซ่อมหรือหลังการขยายเสียงการเลือกสองรอบหรือมากกว่าสองรอบจะลดผลตอบแทนของไลบรารีลงอย่างมาก

เติมปริมาตรไลบรารีในตารางด้านล่างเป็น 100 μlเลือกปริมาตรของเม็ดแม่เหล็กในสองรอบตามขนาดไลบรารีที่ต้องการและดำเนินการเลือกตามคำแนะนำต่อไปนี้

ตารางที่ 5 จำนวนเม็ดแม่เหล็กที่แนะนำสำหรับการเลือกแบบสองรอบ

1. เติมปริมาตรไลบรารีเป็น 100 ไมโครลิตรในหลอด PCR ขนาด 200 ไมโครลิตร และระบุเป็น A เติมเม็ดแม่เหล็กตามตารางที่ 5 (รอบที่ 1) ตามตารางที่ 1 ลงในหลอด A ค่อยๆ เป่าด้วยปิเปตเป็นเวลา 30 วินาทีบ่มตัวอย่างเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง

2. วางท่อ A บนชั้นวางแม่เหล็กที่เหมาะสมเพื่อแยกเม็ดบีดออกจากส่วนเหนือตะกอนเมื่อสารละลายใสแล้ว ให้นำส่วนเหนือตะกอนออกอย่างระมัดระวังในหลอดใหม่และติดป้ายว่า B. ทิ้งเม็ดบีดส์

3. เพิ่มปริมาณเม็ดแม่เหล็กตามตารางที่ 5 (รอบที่ 2) ลงในหลอด B เป่าปิเปตเบาๆ เป็นเวลา 30 วินาทีบ่มตัวอย่างเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้องวางท่อ B บนชั้นวางแม่เหล็กเมื่อสารละลายใสแล้ว ให้ค่อยๆ ขจัดและทิ้งส่วนเหนือตะกอนอย่างระมัดระวัง

4. เติมเอทานอล 80% ที่เตรียมขึ้นใหม่ 200 ไมโครลิตรลงในหลอด B ในขณะที่อยู่ในชั้นวางแม่เหล็กบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 วินาที จากนั้นนำส่วนเหนือตะกอนออกอย่างระมัดระวังและทิ้งไป (อย่ารบกวนเม็ดบีดส์)

5. ทำซ้ำขั้นตอนที่ 6 หนึ่งครั้งรวมการซักสองครั้ง

หมายเหตุ: ตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้เอาของเหลวที่มองเห็นออกทั้งหมดหลังจากการซักครั้งที่สอง

6. ผึ่งลมให้เม็ดแม่เหล็กแห้งจนพื้นผิวของเม็ดแม่เหล็กไม่มีความมันเงาชัดเจน ขณะที่หลอด B อยู่บนชั้นวางแม่เหล็กโดยเปิดฝาไว้

หมายเหตุ: อย่าทำให้เม็ดบีดแห้งเกินไป อาจส่งผลให้การฟื้นตัวของ DNA ลดลงเมื่อลูกปัดเริ่มแตกแสดงว่าแห้งเกินไป

7. ถอดท่อ B ออกจากชั้นวางแม่เหล็กเติมบัฟเฟอร์การชะ 22 ไมโครลิตรลงในหลอดผสมให้เข้ากันโดยการปิเปตขึ้นและลงอย่างน้อย 10 ครั้งหรือบนเครื่องผสมน้ำวนเป็นเวลา 30 วินาทีบ่มเป็นเวลา 3-5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง

หมายเหตุ: หากไม่ดำเนินการจับเป้าหมาย ให้เพิ่มบัฟเฟอร์การชะ (10mM Tris-HCl, ph 8.0-8.5) สำหรับการชะมิฉะนั้นควรใช้น้ำบริสุทธิ์พิเศษที่ผ่านการฆ่าเชื้อเพื่อชะล้าง

• วางท่อ B บนชั้นวางแม่เหล็กถ่ายโอนสารเหนือตะกอน 20 ไมโครลิตรไปยังหลอดใหม่

เพื่อใช้ในการวิจัยเท่านั้น

GDSBio เป็นองค์กรเทคโนโลยีขั้นสูงที่มุ่งเน้นไปที่การวิจัยและพัฒนา การผลิตและการขายผลิตภัณฑ์ด้านชีววิทยาศาสตร์คุณภาพสูงบริษัทมีสายผลิตภัณฑ์ที่สมบูรณ์ โดยมีเทคโนโลยี PCR เป็นแกนหลัก โดยเน้นไปที่ PCR ทั่วไป, PCR เชิงปริมาณเรืองแสง, การจัดเก็บ NGS, อิเล็กโทรโฟรีซิสของกรดนิวคลีอิก และเทคโนโลยีอณูชีววิทยาอื่นๆ และได้พัฒนารีเอเจนต์สำหรับการวิจัยระดับโมเลกุล วัตถุดิบการวินิจฉัยระดับโมเลกุลในหลอดทดลอง รีเอเจนต์การสกัดและตรวจจับกรดนิวคลีอิกและผลิตภัณฑ์อื่นๆ