ทอง Reverse Transcriptase PCR รีเอเจนต์ R3001 2000U

ทองย้อนกลับ Transcriptase R3001 (2,000U)

ชReverse Transcriptase เก่า

ใช้เพื่อการวิจัยเท่านั้น

ส่วนประกอบ

พื้นที่จัดเก็บ

ควรเก็บน้ำยานี้ไว้ที่อุณหภูมิ -30~15°C

คำอธิบาย

Gold Reverse Transcriptase เป็น reverse transcriptase ใหม่ที่ได้รับจากในหลอดทดลองวิวัฒนาการของโมเลกุลขึ้นอยู่กับ M-MLV (RNase H-) Reverse TranscriptasecDNA สายแรกสามารถสังเคราะห์ได้ที่อุณหภูมิ 37~55°CGold Reverse Transcriptase ได้ปรับปรุงความไว ความจำเพาะ ความเสถียรทางความร้อน และครึ่งชีวิตอย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งเหมาะอย่างยิ่งสำหรับการถอดความแบบย้อนกลับของเทมเพลต RNA ที่มีโครงสร้างทุติยภูมิที่ซับซ้อนGold Reverse Transcriptase มีความสามารถในการพอลิเมอไรเซชันและส่วนขยายที่แข็งแกร่งกว่า ซึ่งสามารถใช้สำหรับการสังเคราะห์ cDNA แบบยาวและการสร้างไลบรารี cDNA แบบความยาวเต็มในสัดส่วนที่สูง

ยูนิดงคำนิยาม

ใช้ Poly (rA)·Oligo (dT) เป็นแม่แบบ/ไพรเมอร์ที่ 37°C เป็นเวลา 10 นาที ปริมาณของเอนไซม์ที่ต้องใช้ในการเติม 1 nmol dTTP เป็นสารที่ไม่ละลายในกรดถูกกำหนดเป็น 1 หน่วยของกิจกรรม (U)

ถามคุณภาพคควบคุม

การตรวจจับสารตกค้าง Exonuclease: 200 U ของผลิตภัณฑ์นี้และ 50 pmol สารตั้งต้น DNA แบบเส้นเดี่ยวถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 16 ชั่วโมง และแถบ DNA อิเล็กโตรโฟรีซิสไม่เปลี่ยนแปลงหลังจากการทำให้เสียสภาพธรรมชาติ PAGE อิเล็กโตรโฟรีซิส

การตรวจจับเอนโดนิวคลีเอสตกค้าง: 200 U ของผลิตภัณฑ์นี้และ 0.3 ไมโครกรัมของ pBR322 DNA ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 4 ชั่วโมง และแถบอิเล็กโทรโฟรีซิสของพลาสมิดไม่ได้ถูกเปลี่ยนโดย agarose gel electrophoresis

การตรวจจับสารตกค้างของ RNase: ผลิตภัณฑ์ของ 200 U และ 1 ไมโครกรัมของ 293 เซลล์ RNA ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 30 นาที และแถบอิเล็กโทรโฟรีซิสของ RNA ไม่เปลี่ยนแปลงโดย agarose gel electrophoresis

อีโคไลการตรวจจับการตกค้างของ DNA: ตรวจพบการตกค้างของกรดนิวคลีอิกใน 60 Uอี.โคไลTaqMan qPCR เฉพาะ gDNA และสารตกค้างของอี.โคไลจีโนมน้อยกว่า 10 สำเนา

การตรวจจับการทำงาน 1: 200 เอนไซม์ U ถูกเพิ่มลงในระบบการถอดรหัสแบบย้อนกลับ, 1 μg HeLa เซลล์ RNA ทั้งหมดถูกใช้เป็นแม่แบบ, Oligo (dT)₂₃เป็นไพรเมอร์ และปฏิกิริยาถูกดำเนินการที่ 50°ซ เป็นเวลา 45 นาที 1/10 ผลิตภัณฑ์ cDNA ถูกนำไปสำหรับการขยาย PCR ของวินยีน.Agarose gel electrophoresis ที่มีการย้อมสี EB แสดงแถบความถี่ 4.6 kb เดียว

การตรวจจับการทำงาน 2: เอนไซม์ 200 U ถูกเพิ่มลงในระบบการถอดรหัสแบบย้อนกลับ, 1 pg HeLa RNA ของเซลล์ทั้งหมดถูกใช้เป็นแม่แบบ, Oligo (dT)₂₃เป็นไพรเมอร์ และปฏิกิริยาถูกดำเนินการที่ 50°ซ เป็นเวลา 30 นาที 1/10 ผลิตภัณฑ์ cDNA ถูกนำไปสำหรับการขยาย PCR ของGAPDHยีน.Agarose gel electrophoresis ที่มีการย้อม EB แสดงแถบ 550 bp เดียว

การตรวจจับการทำงาน 3: 500 ng เซลล์ HeLa รวม RNA เป็นแม่แบบ Oligo (dT)₂₃VN เป็นไพรเมอร์, ปฏิกิริยา 50°C เป็นเวลา 45 นาที ผลิตภัณฑ์ cDNA 1/10 ถูกนำมาใช้สำหรับการขยาย PCR ของโพลยีน Agarose gel electrophoresis, การย้อมสี EB, แถบเดียว 7.1 kb (gc-rich) สามารถมองเห็นได้

เรื่องเอ็นอีดิงกความสนใจ

ป้องกันการปนเปื้อนของ RNase

โปรดรักษาพื้นที่ทดลองให้สะอาดควรสวมถุงมือและหน้ากากที่สะอาดระหว่างดำเนินการต้องมั่นใจว่าปราศจาก RNase สำหรับท่อหมุนเหวี่ยง ทิปปิเปต และอุปกรณ์สิ้นเปลืองอื่นๆ ที่ใช้ในการทดลอง

ไพรเมอร์เลือกไอออน

การทดลองติดตามผลฉันพีซีอาร์

หากแม่แบบมีต้นกำเนิดจากยูคาริโอต โดยทั่วไปควรใช้ Oligo dT โดยจับคู่กับหาง 3 'Poly A ของ mRNA ของยูคาริโอตเพื่อให้ได้ผลผลิตสูงสุดของ cDNA แบบเต็มความยาว

ไพรเมอร์จำเพาะของยีน (GSP) มีความจำเพาะสูงสุด อย่างไรก็ตาม ในบางกรณี GSP ที่ใช้สำหรับปฏิกิริยา PCR ไม่สามารถชี้นำการสังเคราะห์ของ cDNA สายแรกได้อย่างมีประสิทธิภาพ ณ จุดนี้ การถอดความแบบย้อนกลับสามารถทำซ้ำได้โดยใช้ Oligo dT หรือ Random เฮกซาเมอร์

hexamers แบบสุ่มมีความจำเพาะต่ำสุด และ RNA ทั้งหมด รวมถึง mRNA, rRNA และ tRNA สามารถใช้เป็นแม่แบบสำหรับ hexamers แบบสุ่ม สามารถใช้ hexamers แบบสุ่มเป็นไพรเมอร์เมื่อพื้นที่เป้าหมายมีโครงสร้างรองที่ซับซ้อนหรือเนื้อหา GC สูง หรือเมื่อแม่แบบเป็นโปรคาริโอต และการใช้ Oligo dT หรือยีนเฉพาะไพรเมอร์ (GSP) ไม่สามารถแนะนำการสังเคราะห์ cDNA ได้อย่างมีประสิทธิภาพ

การทดลองติดตามผลฉันสถามพีซีอาร์

Oligo dT ผสมกับ Random hexamers ส่งผลให้ประสิทธิภาพการสังเคราะห์ cDNA เท่ากันในแต่ละภูมิภาคของ mRNA ซึ่งช่วยปรับปรุงความถูกต้องและความสามารถในการทำซ้ำของผลลัพธ์เชิงปริมาณ

Dongsheng Biotech นำเสนอชุดผลิตภัณฑ์ต่างๆ เพื่อช่วยให้คุณประสบความสำเร็จใน PCRสำหรับเอนไซม์ Taq Polymerase, HS Taq DNA Polymerase, FS Taq DNA Polymerase, Pfu DNA Polymerase และ Fusion Pfu DNA Polymerase ให้ประสิทธิภาพ PCR ที่มีความไวสูง มีประสิทธิภาพ และมีความเที่ยงตรงสูงนอกจากนี้เรายังมี Long Taq DNA Polymerase เพื่อประสิทธิภาพ PCR ที่ยาวนาน