การสร้างห้องสมุด NGS GDSPure การเลือกขนาด DNA และการล้าง Magbeads

รายละเอียดสินค้า

GDSPure DNA Selection Magbeads
แมว.เลขที่: NC1011, NC1012, NC1013
 
ส่วนประกอบ

 
พื้นที่จัดเก็บ
ควรเก็บน้ำยานี้ไว้ที่อุณหภูมิ 2-8°Cอย่าแช่แข็งอายุการเก็บรักษา 2 ปีหากยังไม่เปิดใช้
 
คำอธิบาย
GDSPure DNA Selection Magbeads ใช้เม็ดบีดซุปเปอร์พาราแมกเนติกประสิทธิภาพสูงและอัตราส่วนบัฟเฟอร์ที่ยอดเยี่ยมในการทำให้บริสุทธิ์และเลือกชิ้นส่วน DNA อย่างแม่นยำตั้งแต่ 150 bp ถึง 1,000 bp หรือมากกว่านั้นนิวคลีโอไทด์ เกลือ เอ็นไซม์ และสิ่งเจือปนอื่นๆ ส่วนเกินที่ใช้ในการดำเนินงานสร้างคลัง DNA จะถูกกำจัดออกหลังจากผ่านกระบวนการล้างอย่างง่าย เพื่อให้ได้ชิ้นส่วนที่บริสุทธิ์ ซึ่งสามารถนำไปใช้ได้โดยตรงในการใช้งานขั้นปลาย เช่น การหาลำดับ การผสมข้ามพันธุ์ PCR และเอนไซม์ การย่อย.GDSPure DNA Selection Magbeads สามารถใช้ได้ทั้งรูปแบบอัตโนมัติและแบบแมนนวล
 
แอปพลิเคชัน

การเลือกขนาดและการล้างข้อมูลสำหรับลำดับถัดไป (NGS), ลำดับแซงเจอร์, qPCR, ddPCR และไมโครอาร์เรย์ เป็นต้น
 

เตรียมอุดมศึกษาวออร์คไว้ก่อนตเขาอีประสบการณ์

1. น้ำยาซักผ้า: สารละลายเอทานอล 80% (V/V) สด

2. สารละลายตัวชะ: น้ำที่ปราศจากนิวคลีเอสหรือ TE Buffer

3. กระแสน้ำวน

4. ชั้นวางแม่เหล็ก

5. เพื่อให้มั่นใจถึงความแม่นยำของช่วงการเลือก ปริมาตรตัวอย่าง DNA ควรเป็น ≥ 50 μL

6. ก่อนการทดลอง ให้นำเม็ดแม่เหล็กออกจากตู้เย็นแล้วอุ่นที่อุณหภูมิห้องนานกว่า 20 นาทีก่อนใช้งาน

โปรโตคอล

การเลือกขนาดของชิ้นส่วน DNA ที่ใหญ่กว่าขนาดที่ระบุ (การเลือกด้านเดียว)

1. เตรียมตัวอย่าง DNA 50 ไมโครลิตรลงในหลอดปั่นแยกที่เหมาะสม

2. เพิ่ม Magbeads GDSPure DNA Selection ที่ถูกแขวนลอยจำนวนหนึ่งตามข้อ 1^{เซนต์}อัตราส่วนการเติมลูกปัดในตารางที่ 1 ต่อตัวอย่างค่อยๆ เป่าด้วยปิเปต 10 ครั้ง (หรือกระแสน้ำวนเป็นเวลา 30 วินาที)บ่มตัวอย่างเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง

ตัวอย่างเช่น หากต้องการเลือกชิ้นส่วนทั้งหมดที่มีขนาดใหญ่กว่า 250 bp ในตัวอย่าง ให้เพิ่มสารแขวนลอยด้วยเม็ดแม่เหล็กขนาด 40 μL (0.80X)

3. วางท่อบนชั้นวางแม่เหล็กที่เหมาะสมเพื่อแยกเม็ดบีดออกจากส่วนเหนือตะกอนเมื่อสารละลายใสแล้ว ให้ค่อยๆ ถอดและทิ้งส่วนเหนือตะกอนด้วยปิเปต (อย่าทิ้งเม็ดบีดส์)

4. เติมเอทานอล 80% ที่เตรียมขึ้นใหม่ 200 ไมโครลิตรลงในหลอดในขณะที่อยู่ในชั้นวางแม่เหล็กบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 วินาที จากนั้นนำส่วนเหนือตะกอนออกอย่างระมัดระวังและทิ้งไป (อย่ารบกวนเม็ดบีดส์)

5. ทำซ้ำขั้นตอนที่ 4 หนึ่งครั้งสำหรับการซักทั้งหมดสองครั้ง

หมายเหตุ: ตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้เอาของเหลวที่มองเห็นออกทั้งหมดหลังจากการซักครั้งที่สอง

6. ผึ่งลมให้เม็ดแม่เหล็กแห้งจนพื้นผิวของเม็ดแม่เหล็กไม่มีความมันเงาชัดเจน ขณะที่หลอดอยู่บนชั้นวางแม่เหล็กโดยเปิดฝาไว้

หมายเหตุ: อย่าทำให้เม็ดบีดแห้งเกินไป อาจส่งผลให้การฟื้นตัวของ DNA ลดลงเมื่อลูกปัดเริ่มแตกแสดงว่าแห้งเกินไป

7. ถอดท่อออกจากชั้นวางแม่เหล็กชะล้างเป้าหมาย DNA จากเม็ดบีดลงในน้ำที่ปราศจากนิวคลีเอส 30-40 ไมโครลิตรหรือ TE Bufferผสมให้เข้ากันโดยการปิเปตขึ้นและลงอย่างน้อย 10 ครั้งหรือบนเครื่องผสมน้ำวนเป็นเวลา 30 วินาทีบ่มเป็นเวลา 3-5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง

8. วางท่อบนชั้นวางแม่เหล็กหลังจากผ่านไป 5 นาที (หรือเมื่อสารละลายใส) ให้ย้ายส่วนเหนือตะกอนไปยังหลอดใหม่การเลือกเสร็จสิ้น และสามารถใช้ DNA ที่เลือกสำหรับการทดลองในภายหลังหรือเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20°C เป็นเวลานาน

การเลือกขนาดของชิ้นส่วน DNA ในช่วงขนาดเฉพาะ (การเลือกสองด้าน)

1. เตรียมตัวอย่าง DNA 50 ไมโครลิตรลงในหลอดปั่นแยกที่เหมาะสมและติดฉลากเป็น A

2. เพิ่ม Magbeads GDSPure DNA Selection ที่ถูกแขวนลอยใหม่จำนวนหนึ่งตามข้อ 1^{เซนต์}อัตราส่วนการเติมลูกปัดในตารางที่ 1 ต่อท่อ A ค่อยๆ เป่าด้วยปิเปต 10 ครั้ง (หรือกระแสน้ำวนเป็นเวลา 30 วินาที)บ่มตัวอย่างเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง

ตัวอย่างเช่น หากต้องการเลือกชิ้นส่วนประมาณ 250 bp ในตัวอย่าง ให้เพิ่มสารแขวนลอยด้วยเม็ดแม่เหล็ก 40 μL (0.80X)

• วางหลอด A บนชั้นวางแม่เหล็กที่เหมาะสมเพื่อแยกเม็ดบีดออกจากส่วนเหนือตะกอนเมื่อสารละลายใสแล้ว ให้นำส่วนเหนือตะกอนออกอย่างระมัดระวังในหลอดใหม่และติดป้ายว่า B. ทิ้งเม็ดบีดส์

4. เติมสารแขวนลอยเม็ดแม่เหล็กในปริมาณหนึ่งตามข้อ 2^ndอัตราส่วนการเติมลูกปัดในตารางที่ 1 ต่อท่อ B เป่าปิเปตเบาๆ 10 ครั้ง (หรือกระแสน้ำวนเป็นเวลา 30 วินาที)บ่มตัวอย่างเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง

ตัวอย่างเช่น หากต้องการเลือกชิ้นส่วนประมาณ 250 bp ในตัวอย่าง ให้เพิ่มสารแขวนลอยด้วยเม็ดแม่เหล็ก 10 μL (0.20X)

5. วางท่อ B บนชั้นวางแม่เหล็กเมื่อสารละลายใสแล้ว ให้ค่อยๆ ขจัดและทิ้งส่วนเหนือตะกอนอย่างระมัดระวัง

6. เติมเอทานอล 80% ที่เตรียมใหม่ 200 ไมโครลิตรลงในหลอด B ในขณะที่อยู่ในชั้นวางแม่เหล็กบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 วินาที จากนั้นนำส่วนเหนือตะกอนออกอย่างระมัดระวังและทิ้งไป (อย่ารบกวนเม็ดบีดส์)

7. ทำซ้ำขั้นตอนที่ 6 หนึ่งครั้งสำหรับการซักทั้งหมดสองครั้ง

หมายเหตุ: ตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้เอาของเหลวที่มองเห็นออกทั้งหมดหลังจากการซักครั้งที่สอง

8. ผึ่งลมให้เม็ดแม่เหล็กแห้งจนพื้นผิวของเม็ดแม่เหล็กไม่มีความเงาที่เห็นได้ชัดเจน ขณะที่หลอดอยู่บนชั้นวางแม่เหล็กโดยเปิดฝาไว้

หมายเหตุ: อย่าทำให้เม็ดบีดแห้งเกินไป อาจส่งผลให้การฟื้นตัวของ DNA ลดลงเมื่อลูกปัดเริ่มแตกแสดงว่าแห้งเกินไป

9. ถอดท่อ B ออกจากชั้นวางแม่เหล็กชะล้างเป้าหมาย DNA จากเม็ดบีดลงในน้ำที่ปราศจากนิวคลีเอส 30-40 ไมโครลิตรหรือ TE Bufferผสมให้เข้ากันโดยการปิเปตขึ้นและลงอย่างน้อย 10 ครั้งหรือบนเครื่องผสมน้ำวนเป็นเวลา 30 วินาทีบ่มเป็นเวลา 3-5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง

10. วางท่อ B บนชั้นวางแม่เหล็กหลังจากผ่านไป 5 นาที (หรือเมื่อสารละลายใส) ให้ย้ายส่วนเหนือตะกอนไปยังหลอดใหม่การเลือกเสร็จสิ้น และสามารถใช้ DNA ที่เลือกสำหรับการทดลองในภายหลังหรือเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20°C เป็นเวลานาน

ตารางที่ 1: เงื่อนไขที่แนะนำสำหรับการเลือกขนาด

หมายเหตุ

1. โปรดอ่านคำแนะนำอย่างละเอียดก่อนใช้งานและใช้งานตามคำแนะนำ

2. ควรกำจัดเอทานอลในท่อปั่นแยกออกให้ไกลที่สุดก่อนการชะล้าง เพื่อให้มั่นใจว่าการชะมีประสิทธิภาพ

3. สามารถปรับปริมาตรของสารชะได้ตามข้อกำหนดในการทดลอง แต่ไม่น้อยกว่า 20 ไมโครลิตร

4. เม็ดแม่เหล็กควรหลีกเลี่ยงการหมุนเหวี่ยง การแช่แข็ง และการทำงานอื่นๆก่อนใช้งาน สามารถผสมสารแขวนลอยเม็ดบีดได้อย่างสมบูรณ์ด้วยกระแสน้ำวนและวิธีอื่นๆ และวางไว้นานกว่า 20 นาทีเพื่อให้อุ่นที่อุณหภูมิห้อง

5. หลีกเลี่ยงไม่ให้ของเหลวแขวนอยู่บนฝาปิดท่อในระหว่างการทำงานของกระแสน้ำวนและการปิเปตเพื่อลดการสูญเสีย DNA
 
GDSBio เป็นบริษัทเทคโนโลยีขั้นสูงที่มุ่งเน้นการพัฒนา การผลิต และการตลาดผลิตภัณฑ์วิทยาศาสตร์เพื่อชีวิตที่มีคุณภาพบริษัทมีสายผลิตภัณฑ์ที่สมบูรณ์ โดยมีเทคโนโลยี PCR เป็นแกนหลัก โดยเน้นที่ PCR ธรรมดา, PCR เชิงปริมาณเรืองแสง, การสร้างห้องสมุด NGS, อิเล็กโทรโฟเรซิสของกรดนิวคลีอิก และเทคโนโลยีอณูชีววิทยาอื่นๆ และได้พัฒนารีเอเจนต์วิจัยทางวิทยาศาสตร์ระดับโมเลกุล วัตถุดิบการวินิจฉัยในหลอดทดลองระดับโมเลกุล วัสดุ รีเอเจนต์สกัดและตรวจจับกรดนิวคลีอิก และผลิตภัณฑ์อื่นๆ